Técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) en cardiopatías isquémicas

TEMA: Detección de agentes infecciosos en pacientes sometidos a cirugía cardiaca

Objetivos:

1. Identificar la relación entre la infección por el Citomegalovirus, el Virus Herpes Simple, y la Clamydophila pneumoniae con la aterosclerosis en pacientes operados de cirugía cardiaca.
2. Detectar y cuantificar los genomas de estos virus en tejido vascular.

Tipo de muestra biológica

• Suero sanguíneo
• Tejido según el tipo de cirugía (arteria mamaria, aorta ascendente, válvula aórtica o mitral)

NOTA: Las muestras de tejido extraídas no comprometieron con la salud ni vida del paciente, se tomaron muestras que normalmente son resultado de un excedente o desecho de la cirugía.

Tipo de ácido nucleico

• ADN viral, extraído de la muestra de tejido mediante el estuche comercial QIAsmp DNA Mini Kit.

Gen amplificado 

• Fragmento del genoma de los virus. 16sRNA

Tipo de PCR

• PCR en Tiempo Real (q-PCR)

1. Número de Ciclos: 40 
2. Desnaturalización: 20-30 segundos a 95°C 
3. Hibridación: 50-60°C
4. Extensión: 72°C

Visualización: EFO

Discusión

• La evidencia de la presencia de estos microorganismos en las lesiones ateroescleróticas ha emergido interés en múltiples estudios de los últimos años.
• Se utilizan técnicas como: Inmunohistoquímica, microscopía electrónica, hibridación y amplificación de ADN por PCR, amplificación de ARNm y cultivo de microorganismos a partir de lesiones ateromatosas.
  

   

   TÉCNICA DE PCR EN TIEMPO REAL

  
  

   

Referencia: Detección de agentes infecciosos y otros factores asociados a ateroesclerosis en pacientes sometidos a cirugía cardiaca